紫外可见分光光度计在生物学领域的应用

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紫外可见分光光度计在生物学的应用分析中, 常见的有蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的最大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。

目前, 紫外可见分光光度计的应用主要是在定量分析方面。先从生命科学领域的应用来介绍。紫外可见分光光度计在生命科学中应用非常广泛。最主要的是以下5 个方面。

1. 蛋白质分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在蛋白质的分析中, 最主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的最大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。

2. 核酸分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在核酸分析中的应用, 主要是用来对核酸的定量检测; 因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计的波长GOTO 到核酸的最大吸收峰260nm 上, 测试其吸光度大小就是了。

3. 氨基酸分析工作中的应用

紫外可见分光光度计在氨基酸分析中的应用, 主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的最大吸收峰230nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出氨基酸的含量。但是, 因为氨基酸分析时, 一般是将它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干扰吸收线, 所以, 在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时, 要注意防止干扰的问题。此外, 还需注意: 只有少数氨基酸有紫外吸收, 多数氨基酸无紫外吸收或很弱, 测定时要衍生化后再测。

4. 糖类分析测试工作中的应用

紫外可见分光光度计在糖的分析中, 主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm, 所以, 对糖类进行分析时, 只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的最大吸收峰218 nm上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出糖的含量。

5. 多糖分析测试工作中的应用

紫外可见分光光度计在多糖的分析中, 主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到多糖的最大吸收峰206 nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出多糖的含量。

但是多糖的分析难度很大。因为, 在206 nm 处的时候, 光源(氘灯) 的能量已经很弱, 仪器光学系统的能量输出也很低, 光电倍增管的灵敏度也很低, 206nm 左右的干扰也很大。所以, 用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事, 目前许多科学家正在研究中。