分光光度法测定湖泊水中叶绿素a含量的研究
引言
叶绿素a的含量是评价水体富营养化水平的重要依据，通过叶绿素a的含量可以估算出水体中浮游植物生物量。浮游植物存量过高会造成水体的透明度降低，阳光难以穿透水面阻碍水体中植物进行光合作用，植物本身的呼吸作用会导致水体中氧气被消耗，所以造成水体局部缺氧，而水体表面的浮游植物通过光合作用又会释放大量氧气，这样会形成水体中缺氧，水面氧气过饱和的情况，水生动物（如鱼类）会因为缺氧而死亡；浮游植物生物量过 高还会造成底层浮游生物堆积，在厌氧条件下分解发酵产生有害气体和毒素，伤害水生生物 ；营养化程度高的水体中含有大量的硝酸盐和亚硝酸盐，高 含量硝酸盐和亚硝酸盐水体对人类和其他动物饮用水安全有很大危害。所以，如何快速、准确地检测水体中叶绿素a含量并对水体中叶绿素a含量进行合理控制，这对保护水资源、改善水环境尤为重要。
主要仪器材料
玻璃纤维滤膜（孔径：0.45μm）。
离心管（PTFE材质15mL）。
研磨珠（材质：氧化锆；规格：5mm）。
Tiss-24多样品组织研磨机
DT5-1低速台式离心机
可见分光光度计（上海美析仪器有限公司）。
针式滤器（直径：25mm；孔径：0.45 μm）。
比色皿（1cm）。
试剂
丙酮：GR
丙酮溶液（配比9+1：900mL丙酮+100mL 纯水）。
叶绿素a溶液标准物质（含量：100±3% μg/mL；）
叶绿素a标准中间液：ρ（叶绿素a）=1.00μg/mL。
移取1.00mL叶绿素a标准贮备液于100mL容量瓶中，用丙酮稀释至标线，混匀。
样品
样品的采集
采集分析叶绿素a样品的水样可以使用500mL的玻璃瓶作为采样瓶，在距离水面0.5m的地方进行水样采集，如果水深不足0.5m时采集距离水面中部的水样。如果有泥沙和其他杂物时应将水样静止30min后取水面下5㎝的水样作为分析样品。水样采集完毕宜尽快送实验室。
样品的制备
用量筒准确量取水样100mL，将水样倒入事先准备好带滤膜的过滤装置上进行抽滤，注意抽滤时负压不要过大以免抽破滤膜。待抽滤快结束时用水清洗抽滤器内壁，抽滤结束后取出滤膜，撕去多余空白滤膜然后将有抽滤物的部分对折放入离心管中。在每个离心管中加入一颗研磨珠，将抽滤物和研磨珠压至离心管底部，用分液器在每支离心管中定量加入丙酮溶液10mL盖上盖子，将离心管移至多样品组织研磨机上充分研磨5min。取出离心管移至离心机以转速3000r/min的速度离心10min，取出离心管用纸包好放入0~4℃的冰箱中避光浸泡提取2h。以实验室用水代替样品做空白实验。
分析
打开分光光度计电源并预热15min,以丙酮溶液进行仪器调零。用针式滤器将浸泡提取好的样品过滤至比色皿中在波长750 nm、664nm、647nm、 630nm处测量并记录吸光度。波长750nm处吸光度测量值应小于0.005，测定值不满足要求时需检查比色皿中样品是否存在气泡，如有必要进行二次过滤后测定。
结果计算，按照实验流程首先计算出定容后提取液中叶绿素a的质量浓度为：
方法注意事项
（1）丙酮溶液的配制要严格按照90mL丙酮 +10mL纯水的比例进行配制，否则在测试过程中可能会造成吸收峰的漂移，影响检测结果的准确性。
（2）叶绿素a见光易分解，实验过程中浸泡提取要注意避光操作。
（3）抽滤的过程中要避免因为抽滤压力过大而造成叶绿素a的损失，因为过大的抽滤压力会造成样品细胞被破坏或穿透滤膜。
（4）为保证浮游植物能够被充分研磨，研磨时间至少应保证5min以上，研磨充分的样品比较容易提取和分离。
V-1300PC可见分光光度计
仪器特点
*采用单片微机控制，128*64位液晶显示
*宽大的液晶显示器可显示多组数据
*巨大的内存空间，可存储多组数据和曲线
*自动调0、调100%功能
*波长自动调节
*滤色片自动切换
*宽大样品池（5mm～100mm）
*具有最多十点标样建标准曲线测量功能
*可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量
*可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量
*可断电保存测量设置的标准曲线参数
*配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线
*配USB接口
*可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求
技术指标及基本参数
*波长范围： 320～1100nm
*光谱带宽： 4nm
*波长准确度：±0.5nm
*波长重现性：≤0.2nm
*透射比准确度: ±0.3% τ
*透射比重复性：0.15% τ
*杂散光：≤0.05% τ (340nm NaNO2)
*稳定性： 0.001A/h（500nm预热后）
*测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量
*波长调节：自动调节
*光度范围： -0.3～3A
*显示方式： 128*64液晶
*检测器：进口硅光二极管
*光源：进口钨灯
*电源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz
*功率： 120W
*仪器尺寸：480×350×220mm
*主机净重： 11Kg
关于我们
上海美析仪器公司简介
上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。
美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP 电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP 电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有 12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与 20 多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。
