土壤硝态氮的测定应用方案（紫外分光光度法）

土壤硝态氮的测定应用方案（紫外分光光度法）

方法原理

土壤浸出液中的NO-在紫外分光光度计波长210nm处有较高的吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH-、CO32-、 HCO3、 NO2-和有机质等外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3的干扰。NO2-一般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO3-的含量。

待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。A210 是NO;和以有机质为主的杂质的吸光度;A275只是有机质的吸光度,因为NO3~在275nm处已无吸收。但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍,故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A210中减去，即得NO3在210nm处的吸光度(O A)。

仪器设备及试剂

美析UV-1800紫外可见分光光度计;

石英比色皿

往复式或旋转式振荡机，满足180r/min 土20r/min的振荡频率或达到相同效果;

H₂SO₄溶液(1: 9): 取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。

氯化钙浸提剂[c (CaCl2 .6H20) =0.01mol/L^-1]:称取2.2g 氯化钙(CaCl₂.6H2O)溶于水中，稀释至1L;

硝态氮标准贮备液[ρ(N)= 100μg. mL^-1]:准确称取0.7217g经105°C~110C烘2h的硝酸钾(KNO₃， 优级纯)溶于水，定容至IL，存放于冰箱中;

硝态氮标准溶液[ρ (N)-10μ g. mL]:测定当天吸收10.00mL 硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。

操作步骤

称取10.00g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20℃ ~25℃振荡30min (振荡频率: 180r/min 土20r/min)，干过滤。

吸取25.00mL待测液于50mL三角瓶中，加1.00mL1: 9H₂SO₄ 溶液酸化，摇匀。用滴管将此液装入1cm光径的石英比色槽中，分别在210nm和275nm处测读吸光值(A210 和A275)，以酸化的浸提剂调节仪器零点。以NO₃^-的吸光值(△A)通过校准曲线求得测定液中硝态氮含量。

NO₃的吸光值(△A)可由下式求得:

△A=A₂₁₀-A₂₇₅×R

式中R为校正因数，是土壤浸出液中杂质(主要是有机质)在210nm和275nm处的吸光度的比值。其确定方法为:

A₂₁₀是波长210nm处浸出液中NO;的吸收值(A_210硝)与杂质(主要是有机质)的吸收值(A_210杂)的总和，即A₂₁₀=A_210硝十A_210杂，得出A_210杂= A₂₁₀-A_210硝。选取部分土样用

酚二磺酸法测得NO₃^--N的含量后，根据土液比和紫外法的工作曲线，即可计算各浸出液

应有的A_210硝值，即可得出A_210杂。

A275是浸出液中杂质(主要是有机质)在275nm处的吸收值( 因为NO;在该波长处已无吸收)，它比A_210杂小R倍，即_A210杂=R.A₂₇₅，得出校正因数R=A_210杂/ A₂₇₅。

各不同区域可根据多个土壤测定R值的统计平均值，作为其他土壤测试NO₃^--N的校正因数，其可靠性依从于被测土壤的多少，测定的土壤越多，可靠性越大。

校准曲线的绘制:分别吸取10μg .mL'NO3^--N标准溶液0，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00mL,用氯化钙浸提剂定容至50mL，即为0、0.2，0.4，0.8，1.2，1.6μg. mL^-1的标准系列溶液。各取25.00mL于50mL三角瓶中，分别加lmL 1: 9H2SO4 溶液摇匀，用标准系列溶液的零浓度调节仪器零点测A₂₁₀，计算A₂₁₀对NO₃^--N浓度的回归方程，或者绘制工作曲线。

结果计算

土壤硝态氮(N)

式中: ρ一查校准曲线或求回归方程而得测定液中NO3-N的质量浓度，μg. mL^-1;

V_浸提剂体积，mL (50mL);

D-一浸出液稀释倍数， 若不稀释则D=1;

10³和1000-分别将ug换算成mg和将g换算为kg;

m一土壤质量，g;

注意事项

1)土壤硝态氮含量- -般用新鲜样品测定，如需以硝态氮加铵态氮反映无机氮含量，则

可用过2mm筛的风干样品测定，但需标明为风干基。

2) 一般上壤中NO2含量很低，不会干扰NO;的测定。如果NO2含量高时，可用氨基

磺酸消除(HNO₂+NHSO₃H=N2+H₂SO₄+H₂0)，它在210nm处无吸收，不干扰NO_3.测定。

3)浸出液的盐浓度较高，操作时最好用滴管吸取注入比色皿中，尽量避免溶液溢出比色皿外，污染比色血的外壁，影响其透光性。

4)大批样品测定时，可先测完各液(包括浸出液和标准系列溶液)的A₂₁₀值， 再测A₂₇₅值，以避免逐次改变波长所产生的仪器误差。

5)如需同时测定土壤NH4⁺-N，可选用2 mol. Ll KC1或1 mol. Ll NaCl 溶液制备待测液。但2 mol.L^-1 KCl 溶液本身在210nm处吸光度较高，因此同时测定土壤NH4⁺-N和NO₃-N时，可选用吸光度较小的1 mol.L^-1 NaCl溶液为浸提剂。

6)如果吸光度很高(A>1时)，可从比色槽中吸出- -半待测液，再加一-半水稀释，重新测读吸光度，如此稀释直至吸光度小于0.8。再按稀释倍数，用氯化钙浸提剂将浸出液准确稀释测定。

7)根据北京和河北石灰性15个土壤样品的测试结果，校正因素(R)的平均值为3.6,不同土类的R值略有差异，各地可根据主要土壤情况进行校验，求出当地土壤的R值。

仪器参数

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