紫外分光光度法测定紫云英蜜中总酚含量
发布日期：2017-08-28 点击次数：
关键词：紫外分光光度法；紫云英蜜；美析仪器www.macylab.com；UV-1300PC型
目的：建立紫云英蜜中总酚含量测定方法。
方法：采用Folin酚法，样品经福林试剂显色反应后，紫外可见分光光度计测定其总酚含量。
结果：总酚在2.03～8.04μg·mL-1内线性良好，r=0.9997，且平均回收率为102.42%，RSD=2.64%(n=5)。
结论：该方法准确，简便，重现性好，专属性强，可有效地控制紫云英蜜的质量。
紫云英蜜又名红花草蜜或草子蜜，具有大自然清新宜人的草香味，甜而不腻，鲜洁清甜，色泽为浅琥珀色。富含多糖、多酚、氨基酸、维生素、微量元素等多种营养成分，长期饮用可补气血，健脾胃，增强抗病能力，强身健体。且其中的多酚酸具有抗病原微生物、抗炎症、抗变态反应、抗心血管疾病和抗氧化等作用。为了控制产品质量，我们采用Folin酚法对贵州不同产地的紫云英蜜中总多酚含量进行了研究。
1仪器与试药
1.1仪器
紫外可见分光光度计(美析UV-1300PC型);超声波清洗仪;恒温水浴锅。
1.2试药
原儿茶酸对照品；钨酸钠，磷钼酸，85%磷酸，N a2CO3，以上试剂均为分析纯；水为蒸馏水；
1.3福林试剂的配制：
称取钨酸钠40g，磷钼酸8g和85%磷酸20mL，溶于300ml蒸馏水，煮沸加热回流2h，冷却，稀释至400mL，置于棕色瓶中保存。
1.4Na2CO3溶液的配制
称取15gNa2CO3，溶于200mL蒸馏水中，即为75g·L-1Na2CO3溶液。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
原儿茶酸对照品的配制：称取原儿茶酸对照品15.80mg于50mL容量瓶中，蒸馏水溶解并定容，摇匀，备用，浓度为316μg·mL-1。
2.2供试品溶液的制备
取同一批样品，精密称定，置于50mL容量瓶中，超声使溶，过滤，取20mL续滤液定容成50mL，摇匀，备用。
2.3测定方法
精密吸取适量样品溶液1mL于10mL带塞离心管中，加入2.5mL福林试剂，放置5min，再精密加入Na2CO3溶液2mL，50℃水浴保持5min，再取出室温放置2h，于760nm左右测定吸光度值。
2.4标准曲线的制备
从原儿茶酸标准储备液中分别吸取1，1.5，2，2.5，3，3.5mL于25mL容量瓶中，蒸馏水稀释定容，摇匀，浓度分别为12.64μg·mL-1，18.96μg·mL-1，25.28μg·mL-1，31.60μg·mL-1，37.92μg·mL-1，44.24μg·mL-1，分别从中精密吸取1mL，按2.3测定方法反应，测定吸光度值。以终浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得回归方程为Y=0.0932X-0.0315，r=0.9997。结果表明总酚在12.64μg·mL-1～44.24μg·mL-1范围内线性良好。
2.5精密度试验
取同一份对照品按上述反应后连续测定5次，吸光度值RSD=0.386%。结果表明仪器精密度良好。
2.6样品吸光度值稳定性试验
按2.2供试品溶液制备方法制备样品液，并按2.3测定方法反应后，每隔5min测定一次，观察吸光度值变化，结果1h内的吸光度值RSD=1.42%，结果见图1。结果表明样品显色后在1h内较稳定。
2.7重现性试验
取同一批样品，平行5份，精密称定，按供试品溶液法制备，并按2.3测定法反应。结果表明，样品的平均含量为2.154mg·g-1，RSD=3.43%。结果表明方法重现性良好。
2.8加样回收率试验
取同一批样品，精密称定，精密加入337μg·mL-1原儿茶酸对照品2mL，按供试品溶液法操作，并按2.3测定样品中总酚的含量，结果表明，其回收率为102.42%，RSD=2.64%，数据见表1。表1总酚加样回收率试验结果(略)
2.9样品含量测定
分别精密称取贵州不同产地的样品，每批平行取5份，按2.3测定方法操作，测定每批样品中总酚平均含量。结果见表2。表2不同批次样品总酚含量(略)
3讨论
植物多酚的测定方法有多种，曾考察普鲁士蓝法、重氮比色法等，均因为方法显色不稳定或方法步骤复杂而未采用。而Folin酚法实验操作较简单，且结果稳定可靠，故选用该方法作为紫云英蜜中总酚含量测定方法。
关键词：紫外分光光度法；紫云英蜜；美析仪器www.macylab.com；UV-1300PC型
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